Zložitá a hydrofóbna syntéza peptidov

Zložitá syntéza peptidov|Prispôsobenie hydrofóbnych peptidov|Zložitá syntéza peptidov|Syntéza klastrovej sekvencie|Vedecký-peptid

Sekvencia peptidov je príliš hydrofóbna? Ľahko agregovať? Viac párov disulfidových väzieb? Služby Science-Difficult Peptide Synthesis a Hydrofóbna syntéza peptidov sa špecializujú na všetky druhy „nedokážem to urobiť“. 20 dlhoročné skúsenosti, špeciálne systémy rozpúšťadiel, stabilné dodávky. Neváhajte nás kontaktovať.

Aké peptidy sa považujú za „ťažké“?
Keďže som 20 rokov v oblasti syntézy peptidov, videl som všetky druhy zložitých peptidov. Keď k nám zákazníci prídu, už sa pýtali viacerých firiem a odpoveď, ktorú dostanú, je buď „Nedokážem to“ alebo „Vyskúšaj, bez záruky“.

Peptid so silnou hydrofóbnosťou: transmembránová oblasť, signálny peptid, hydrofóbna aminokyselina, keď sa syntetizuje, zhlukne sa na živici a aminokyselina za ňou nebude môcť vstúpiť.
Peptidy, ktoré sa ľahko agregujú, ako sú amyloidné a antimikrobiálne peptidy, sa pri syntetizácii hromadia a pri čistení upchávajú kolónu.
Peptidy s viacerými pármi disulfidových väzieb: viac ako tri páry, jeden nesprávny krok v poradí párovania a celá molekula je zničená.
Dlhý peptid: viac ako 60 aminokyselín, každý krok výťažku klesá a nakoniec nezostalo nič.
Komplexná kombinácia modifikácií: fosforylácia, fluorescencia, cyklizácia a podmienky, ktoré medzi sebou bojujú.
Môžeme ich vziať všetky, a to nie je „skúsiť“, je to „mať plán“.

1. Hydrofóbne peptidy: so špecializovanými systémami rozpúšťadiel
Náročnosť hydrofóbnych peptidov spočíva v tom, že sa nedajú rozpustiť v bežných rozpúšťadlách a pri syntéze sa peptidový reťazec na živici „zhlukuje“, čo znemožňuje vstup aminokyselín za ním.

Naše riešenie:
Špeciálna kombinácia rozpúšťadiel: DMF, NMP, DCM zmiešaný systém, plus trochu tekutého uvoľňovacieho činidla, aby bol peptidový reťazec stále natiahnutý.
Optimalizácia teploty: niektoré reakcie sú lepšie pri 40 stupňoch ako pri izbovej teplote, niektoré musíme znížiť na 0 stupňov, skúšali sme ich jednu po druhej.
Výber živice: Pre hydrofóbne peptidy použite živicu s vysokou rozpustnosťou, aby ste ponechali dostatok miesta pre peptidové reťazce.
Solubilizované značky: Ak nemôžete, pridajte hydrofilnú značku a po syntéze ju odrežte.

Skutočný prípad: 35aa transmembránový peptid, hydrofóbne aminokyseliny predstavovali 70%, zákazník hľadal tri spoločnosti nemožno urobiť. Zmenili sme systém rozpúšťadiel a pridali solubilizačný štítok, nakoniec bola čistota 92% a zákazník hladko vykonal štúdiu štruktúry.

2. Viaceré páry disulfidových väzieb: žiadne šťastie, stratégia
Čím viac disulfidových väzieb je, tým ťažšie je spárovať ich. Dva páry sú fajn, ale tri a viac párov a jeden chybný krok a je po všetkom.
Naša stratégia:
Ortogonálna ochrana: Cys možno otvoriť a spárovať v krokoch s použitím rôznych ochranných skupín, ako sú Trt, Acm, tBu.
Optimalizácia oxidačných podmienok: oxidácia vzduchom, oxidácia glutatiónu, oxidácia jódu, rôzne metódy pre rôzne peptidy.
Stredná kontrola kvality: Po každom páre odoberte vzorku na MS a pred pokračovaním potvrďte párovanie.
Potvrdenie MS/MS (voliteľné): konečné rozdelenie-pomocou sekundárnej hmotnostnej spektrometrie, aby sa zistilo, kde sú vlastne disulfidové väzby pripojené.

A real case: A conotoxin peptide containing four pairs of disulfide bonds was rejected by many companies. We designed a four-step oxidation strategy, which took six weeks, and delivered >90% čistota, správne spárované disulfidové väzby a kryštálovú štruktúru následne riešil zákazník.

3. Peptidy náchylné na agregáciu{{1}: syntetizujú sa pri obrane
Niektoré peptidy prirodzene milujú agregáciu, ako napríklad amyloidný proteín a antibakteriálny peptid. Keď sa syntetizujú, začnú sa agregovať, pri čistení blokujú kolónu a nemožno ich rozpustiť, keď sú v ruke.
Naše riešenie:
Pseudoprolín: Pseudoprolín sa zavádza v polohe Ser/Thr, aby sa narušila tendencia k agregácii a po syntéze sa zmenila späť.
Segmentová syntéza: Peptidy, ktoré sú príliš polymerizované, sa rozrežú na niekoľko segmentov a syntetizujú sa oddelene a potom sa na konci znova spoja.
Optimalizácia podmienok čistenia: vysoká teplota, kyslé pH, pridanie organických rozpúšťadiel na nájdenie podmienok, vďaka ktorým nebude-polymerizovať.

4. Komplexné kombinácie modifikátorov: podmienky bez bojov
Niektoré peptidy majú viacero požiadaviek: fosforyláciu, fluorescenčné značenie a cyklizáciu. Tieto modifikácie môžu byť vo vzájomnom konflikte -, napríklad fosforylácia je kyslá-fóbna, fluorescenčné značenie je svetlo-fóbne a cyklizácia vyžaduje špecifické pH.
Náš prístup:
Návrh stratégie ochrany: ktorý orez urobiť ako prvý, ktorý orez urobiť neskôr, navrhnutý vopred.
Ortogonálne podmienky: Podmienky každého kroku reakcie neovplyvňujú už vykonané úpravy.
Stredná kontrola kvality: Po každom kroku úpravy odoberte vzorku, aby ste sa uistili, že je vykonaná správne, než budete pokračovať.

5. Čistota: Podľa toho, čo s tým robíte

Každý peptid je sprevádzaný správou HPLC a MS, vďaka čomu sú údaje o čistote transparentné.

1. Robíme to už 20 rokov
Zložitá syntéza peptidov nie je niečo, čo môže urobiť každý. V priebehu rokov sme zvládli množstvo zložitých peptidov: transmembránové proteíny, vírusové fúzne peptidy, konotoxíny, amyloidné proteíny, antimikrobiálne peptidy atď. Máme dobrú predstavu o tom, ktoré sekvencie sú náchylné na problémy a ktoré podmienky ich dokážu zachrániť. Aspoň nemusíte vyskúšať každý jeden z nich, ak k nám prídete na náročnú a hydrofóbnu syntézu peptidov.

2. Nie je to „skúsiť“, je to „mať program“.
Veľa spoločností preberá ťažké peptidy a hovorí: „Vyskúšame to, ale nezaručujeme to“. My takto nehráme. Pred prijatím objednávky zhodnotíme poradie, aký je podiel hydrofóbnych aminokyselín, či je známa tendencia k agregácii, koľko párov disulfidových väzieb a či je modifikácia zložitá alebo nie. Po vyhodnotení vám povieme: aká je úspešnosť a aká dlhá je doba cyklu.

Neprijímame zákazky, ktoré sa nedajú urobiť a zákazky, ktoré sme prijali, musíme odovzdať.

3. Špecializované systémy rozpúšťadiel pre hydrofóbnosť
Hydrofóbny peptid je našou silnou stránkou. Ak sa konvenčné rozpúšťadlo nemôže rozpustiť, zmeníme rozpúšťadlo; ak konvenčná teplota nereaguje, upravíme teplotu; ak konvenčná živica nevydrží, živicu vymeníme. Existuje tiež solubilizačný štítok ako spätná cesta von.

4. Viacero párov disulfidových väzieb, krok-za-krokom
Ak existujú viac ako tri páry disulfidových väzieb, použijeme postup-za{1}}krokom: prvým krokom je ochrana A a otvorenie prvého páru; chráňte B a otvorte druhý pár; chráňte C a otvorte tretí pár. Po každom kroku odoberieme vzorky pre MS a potvrdíme párovanie predtým, ako sa pohneme ďalej. Nakoniec bude MS/MS rozbitý a overený a údaje vám budú poskytnuté bez vášho hádania.

5. Kontrola kvality: údaje na každom kroku
Kontrola kvality zložitých peptidov musí byť starostlivejšia:
Intermediate QC: Po každom fragmente a každom kroku modifikácie najskôr zmerajte čistotu a molekulovú hmotnosť.
Konečný produkt: HPLC pre čistotu, MS pre molekulovú hmotnosť.
Test rozpustnosti: Poskytnite odporúčané rozpúšťadlá a metódy solubilizácie, aby ste nezískali peptidy, ktoré sa nerozpustia.
Pri vykonávaní náročnej a hydrofóbnej syntézy peptidov údaje hovoria samé za seba, každý krok je možné vysledovať.

• Forma podávania: lyofilizovaný prášok, centrifugačné skúmavky alebo liekovky.
• Sprievodné dokumenty:COA (HPLC profil + MS spektrum), súhrnná správa (voliteľné).
• Voliteľné testy: obsah peptidov, endotoxín, vlhkosť, zloženie aminokyselín, test rozpustnosti.
• Prispôsobené balenie: porciovanie a označovanie podľa vašich požiadaviek.
• Každý náročný a hydrofóbny produkt syntézy peptidov je pred odoslaním skontrolovaný, aby sa zaistilo, že sekvencia je správna a čistota zodpovedá štandardu.

Či už vás odmietli iní, alebo to nedokážete urobiť vo svojom vlastnom laboratóriu, môžete sa s nami porozprávať. Ak hľadáte vedecký-peptid na náročnú a hydrofóbnu syntézu peptidov, aspoň nemusíte skúšať jeden po druhom.

Potrebujem, aby si mi povedal:
Peptidová sekvencia (alebo informácie o cieli)
Už ste to robili niekomu inému? Aký je výsledok?
Koľko (miligramy)
požiadavky na čistotu

Kedy to chceš?

Poskytnite vám posúdenie uskutočniteľnosti a cenovú ponuku programu do 24 hodín.