Syntéza dlhých peptidov|Prispôsobenie peptidu s dlhým reťazcom|Zložitá syntéza peptidov|Peptidy nad 50mér|Vedecký-peptid
Meta popis
Potrebujete dlhý peptid s viac ako 50 aminokyselinami? Služba Science-Služba syntézy dlhých peptidov od spoločnosti Science pokrýva 50 – 189 aminokyselín so segmentovanou stratégiou syntézy, ktorá prekonáva problémy s hydrofóbnou agregáciou a nízkou účinnosťou syntézy, atď. 20 roky skúseností a stabilné dodávanie. Vitajte a kontaktujte nás.
Dlhé peptidy: Čím dlhšie sú, tým viac problémov spôsobujú
Prečo je ťažké vyrobiť dlhé peptidy?
Každý, kto robil syntézu peptidov, vie, že problém nastáva, keď je peptidový reťazec dlhý: v rámci 20 aminokyselín to dokáže väčšina spoločností. Keď ide o viac ako 40 aminokyselín, začneme vyberať poradie. Pri 60 a viac aminokyselinách sa počet spoločností, ktoré môžu prevziať, zníži na polovicu. Pokiaľ ide o viac ako 100 aminokyselín, nie je veľa spoločností, ktoré sa na to odvážia.
prečo? Pretože syntéza dlhých peptidov naráža na niekoľko úskalí:
Účinnosť syntézy klesá: pri každom predĺžení aminokyseliny sa výťažok zníži raz za . 30 aminokyselinový peptid, v každom kroku je výťažok 99 %, konečný výťažok je stále 74 %; 60 aminokyselín, každý krok je stále 99%, konečný výťažok je len 55%. V skutočnosti výťažok mnohých krokov nemôže dosiahnuť 99%.
Hydrofóbna agregácia: Keď je v dlhom peptide veľa hydrofóbnych aminokyselín, peptidový reťazec sa začne „zhlukovať“ na živici a aminokyseliny za ním nemôžu vstúpiť.
Ťažkosti pri čistení: retenčný čas dlhých peptidov a nečistôt sú príliš blízko seba na čistý rez.
Zlá rozpustnosť: Keď sa získa peptid, nedá sa rozpustiť, takže experiment nemožno vykonať.
V týchto výmoľoch sme už boli a vieme, ako ich obísť.
Čo môžeme urobiť
1. Dĺžka: 50-189 aminokyselín
|
rozsah dĺžky |
Náročnosť |
Zažili sme situácie, kedy |
|
50-80 aa |
Vyššia stredná trieda |
Routine program with >90% úspešnosť |
|
80-120 aa |
Vysoká |
Potrebujete segmentovanú stratégiu syntézy, dostatok skúseností |
|
120-150 aa |
Veľmi vysoká |
Urobil som ich veľa, až 150. |
|
150-189 aa |
Mimoriadne vysoká |
Úroveň výzvy s príbehmi o úspechu |
2. Stratégia segmentovanej syntézy
Najúčinnejší spôsob, ako sa vysporiadať s dlhými peptidmi, je rozdeliť ich:
Výber segmentu: Nakrájajte dlhý peptid na 2-4 segmenty po 30-60 aminokyselinách. Bod rezu by mal byť umiestnený v polohe, kde je obtiažnosť syntézy nízka, napríklad, aby sa zabránilo súvislej hydrofóbnej oblasti.
Syntéza fragmentov: Každý fragment sa syntetizuje a čistí jednotlivo na dostatočne vysokú čistotu.
Spájanie fragmentov: spájanie fragmentov dohromady v roztoku alebo na živici. Spôsob spájania môže byť buď prírodný, chemický alebo enzymatický.
Skladanie: Ak má peptid disulfidovú väzbu, musí byť po zostrihu zložený do správnej konformácie.
3. Čistota: V závislosti od experimentálnych požiadaviek
|
Úroveň čistoty |
Použiteľné scenáre |
|
Konvenčná čistá (85 – 95 %) |
Kombinácia experimentálneho, aktívneho primárneho skríningu |
|
Vysoká čistota (95-98%) |
bunkové experimenty, funkčné overenie |
|
Ultrapure (>98%) |
Štrukturálne štúdie, kryštalografia |
Každý dlhý peptid je sprevádzaný správou HPLC a MS, vďaka čomu sú údaje o čistote transparentné.
4. Úpravy: dlhé peptidy môžu tiež pridať funkciu
Fluorescenčné značenie: FITC, TAMRA, chcete vidieť, kde prebieha dlhý peptid.
Biotín:Stiahnite-nadol alebo otestujte.
Izotopové značenie: pre kvantifikáciu NMR alebo hmotnostnou spektrometriou.
Fosforylácia/glykozylácia: napodobňovanie post{0}}translačných modifikácií.
Prečo prísť k nám na syntézu dlhých peptidov?
1. Robíme to už 20 rokov
Syntéza dlhých peptidov nie je niečo, čo môže robiť každý. V priebehu rokov sme spracovali veľa dlhých peptidov: transmembránové proteínové fragmenty, vírusové fúzne peptidy, amyloidné proteíny, antimikrobiálne peptidy atď. Máme dobrú predstavu o tom, ktoré sekvencie sa dajú ľahko agregovať a aké podmienky ich môžu zachrániť. Ak k nám prídete na Syntézu dlhých peptidov, aspoň nemusíte zo začiatku šliapať do jamy.
2. Frakčná syntéza: nie len krájanie na kúsky
Segmentácia znie jednoducho, ale dôležité je, kde rezať, ako dlho je každý segment a ako ich spojiť. Máme niekoľko zásad:
Rezanie v hydrofilnej zóne: Vyhnite sa rezaniu v hydrofóbnom jadre, inak sa segmenty samy zhromažďujú.
Vyvážte dĺžku fragmentov: Nerobte to, aby bol jeden segment obzvlášť náročný a ostatné segmenty obzvlášť jednoduché. 3.
Výber bodu pripojenia: Prirodzené chemické spojenia vyžadujú tioester na C-konci a Cys na N-konci, ktoré musia byť navrhnuté vopred.
3. Hydrofóbne peptidy: špeciálny systém rozpúšťadiel.
Niektoré dlhé peptidy sú tak hydrofóbne, že sa nedajú vyriešiť bežnými rozpúšťadlami, takže pri syntéze sa na živici zhlukujú. Máme špeciálny systém rozpúšťadiel a prísady na udržanie natiahnutia peptidového reťazca počas procesu syntézy, aby mohli vstúpiť nasledujúce aminokyseliny.
4. Kontrola kvality: údaje na každom kroku
Kontrola kvality dlhých peptidov je zložitejšia ako kontrola krátkych peptidov:
Kontrola kvality medziproduktov: po syntéze každého fragmentu najskôr zmerajte čistotu a molekulovú hmotnosť a potom prejdite na ďalší krok po absolvovaní testu.
Monitorovanie procesu spájania: Odoberte vzorku reakcie pripojenia a zmerajte MS, aby ste videli účinnosť pripojenia.
Kontrola konečného produktu: HPLC na čistotu, MS na molekulovú hmotnosť, MS/MS na správnosť sekvencie (voliteľné).
Test rozpustnosti: Poskytnite odporúčané rozpúšťadlá a metódy solubilizácie, aby ste nezískali peptidy, ktoré sa nerozpustia.
Pri syntéze dlhých peptidov údaje hovoria samé za seba a každý krok je vysledovateľný.
5. Od miligramov po sto miligramov, až do konca
Miligramy na skríningovú fázu, desať miligramov na overovaciu fázu, sto miligramov na štrukturálnu štúdiu - to všetko zvládneme. Ten istý projekt, ten istý náprotivok, nie je potrebné znovu-harmonizovať.
Na čo sa môžu dlhé peptidy použiť?
|
Oblasti výskumu |
Bežné použitia |
Zažili sme situácie, kedy |
|
membránové proteíny |
transmembránové fragmenty, extracelulárne slučky |
Dlhý peptid s viacerými transmembránovými oblasťami, vysoko hydrofóbny |
|
vírusové proteíny |
Fúzne peptidy, receptorové-väzbové domény |
Nový fragment proteínu S koronavírusu, približne 100 aa |
|
Amyloid |
A , -synukleín |
42aa je norma. Boli urobené dlhšie |
|
Antimikrobiálne peptidy |
Antimikrobiálne peptidy s dlhým-reťazcom |
Niektoré prírodné antimikrobiálne peptidy majú iba 40-60 aa |
|
Cytokíny |
simulácia aktívnej zóny |
50-80aa, s disulfidovými väzbami |
|
štruktúrna biológia |
NMR, kryštalografia |
Isotopically labeled peptide, purity >98%. |
Dodávka a kontrola kvality
- Dodávka: Lyofilizovaný prášok, centrifugačné skúmavky alebo liekovky, chránené dusíkom.
- Sprievodné dokumenty:COA (HPLC profil + MS profil), MS/MS (voliteľné potvrdenie sekvencie), správa o syntéze (proces segmentácie a spájania).
- Voliteľné testy: obsah peptidov, endotoxín, vlhkosť, zloženie aminokyselín, test rozpustnosti.
- Prispôsobené balenie: porciovanie a označovanie podľa vašich požiadaviek.
- Každý produkt syntézy dlhých peptidov je pred odoslaním dvakrát-skontrolovaný, aby sa zaistilo, že sekvencia je správna a čistota zodpovedá štandardu.
Tri skutočné-prípady zo života
Prípad 1: Membránový proteínový program vo výskumnom ústave
The customer needs a 85aa transmembrane peptide for structural study. This peptide has 60% of hydrophobic amino acids, so many companies could not make it. We used segmental synthesis, cut into three segments, each segment is about 30aa, purified and then liquid-phase ligated. The final purity of the peptide is >95% a zákazník to dostal a urobil NMR.
Prípad 2: Vírusový proteínový program nadnárodnej farmaceutickej spoločnosti
A 110aa viral fusion peptide with two pairs of disulfide bonds was required for inhibitor screening. We designed a segmented synthesis strategy to synthesize three linear fragments first, which were joined and then oxidized to form disulfide bonds. The final product was delivered with >90% čistota, správne spárované disulfidové väzby a prešli overením aktivity.
Prípad 3: Výskum amyloidu na národnej univerzite
The customer needs a 70aa fragment of alpha-synuclein for the study of aggregation mechanism. This peptide is easy to form fibers and always blocked the column during purification. We optimized the mobile phase conditions, added a small amount of organic solvent, and finally obtained a product with purity >95% a zákazník úspešne vykonal ThT experimenty.
Hovoríte o vašich potrebách dlhých peptidov?
Či už chcete 80aa transmembránový peptid alebo 150aa vírusový proteín, môžete sa s nami porozprávať. Ak požiadate Science-Peptide, aby vykonal syntézu dlhých peptidov, aspoň to nemusíte skúšať jeden po druhom.
Potrebujem, aby si mi povedal:
Peptidová sekvencia (alebo informácie o cieli)
Koľko (miligramy)
požiadavky na čistotu
nemajú žiadne disulfidové väzby ani iné modifikácie
Kedy to chceš?
Poskytnite vám posúdenie realizovateľnosti a cenovú ponuku do 24 hodín.