Nečistoty tirzepatidu

Tirzepatid Nečistoty|Kontrola nečistôt Tilpeptide|Vlastná syntéza nečistôt a potvrdenie štruktúry|Vedecký-peptid

Kontrola nečistôt Tirzepatid - pre GLP-1/GIP duálny{4}}výskum kvality liekov, podávanie správ o generických liekoch.Science-Peptid poskytuje vlastnú syntézu nečistôt súvisiacich s tilpeptidom, vrátane delečných peptidov, oxidovaných nečistôt, produktov na odlupovanie mastných kyselín, štrukturálnych údajov na potvrdenie nečistôt atď. spektroskopická štúdia s údajmi o štruktúrnom potvrdení. Vitajte a kontaktujte nás.

Tirzepatid (Tirzepatid) je duálny agonista GLP-1/GIP, s ktorým prišla Eli Lilly, a tieto dva roky je v plnom prúde. Má dobrý účinok na zníženie cukru a silný účinok na zníženie hmotnosti a nazýva sa vylepšená verzia "zázračného lieku na chudnutie". Domáci výrobcovia peptidových generických liekov na to mnohí čumia – po vypršaní patentu, kto si môže najskôr prebehnúť kvalitu výskumu, kto bude mať možnosť uchmatnúť si prvé generikum.

 

Kvalitu tilpeptidu však nie je také ľahké študovať. Je komplexnejší ako simetikón, má 39 aminokyselín, bočný reťazec mastnej kyseliny (kyselina eikosandiová) a linker. Nečistoty, ktoré sa môžu objaviť počas procesu syntézy, sú oveľa vyššie ako u bežných peptidov. Chýbajúce peptidy, oxidačné nečistoty, produkty vylučovania mastných kyselín, diméry, nečistoty súvisiace-s linkermi musia mať kontrolu, každá musí byť jasná.

 

Nazbierali sme veľa skúseností v syntéze komplexných peptidových nečistôt. Špecializujeme sa na štúdium tilpeptidu a vieme, aké sú ťažkosti v jeho profile nečistôt a aké sú základné kontrolné položky. Môžeme prispôsobiť syntézu rôznych kontrol tilpeptidových nečistôt podľa vašich potrieb s údajmi o potvrdení štruktúry a pomôžeme vám stanoviť metódu tak, že pri podávaní bude menej pravdepodobné, že vám bude vystavený dodatok.

Molekulárna štruktúra tilpeptidu určuje, že jeho profil nečistôt je oveľa komplexnejší ako profil všeobecných peptidov. Keď robíme štúdie nečistôt, zameriavame sa hlavne na tieto kategórie:

Chýbajúci peptid
39 aminokyselín, z ktorých ktorákoľvek chýba počas procesu syntézy, je nečistota. Retenčné časy chýbajúcich peptidov na HPLC boli široko distribuované, s rôznou polaritou chýbajúcich peptidov v rôznych polohách. Niektoré chýbajú na N-konci, niektoré v strede a niektoré blízko miesta pripojenia mastnej kyseliny. Od zákazníka sme dostali objednávku na 15 chýbajúcich peptidov v rôznych polohách, aby sme lokalizovali všetky možné chýbajúce nečistoty v ich procese.

Oxidujúce nečistoty
Met v sekvencii tilpeptidu je náchylný na oxidáciu na sulfoxid a potom na sulfón. Oxidované nečistoty sa často objavujú v štúdiách stability a po určitom čase rastú. Urobili sme porovnanie, za zrýchlených podmienok po dobu jedného mesiaca môže vrchol oxidácie narásť na viac ako 0,3% bez kontroly.

Produkty na odbúravanie mastných kyselín
Toto je nečistota jedinečná pre tilpeptid. Jeho bočný reťazec mastnej kyseliny (kyselina eikozándiová) je pripojený k lyzínu cez linker a táto modifikácia sa môže čiastočne uvoľniť počas syntézy alebo skladovania, čo vedie k -odstráneniu nečistôt z mastných kyselín. Problematickejšie je, že k odlupovaniu môže dochádzať na rôznych miestach - medzi mastnou kyselinou a linkerom alebo medzi linkerom a peptidom -, čo vedie k rôznym nečistotám. Pre našich zákazníkov sme syntetizovali niekoľko nečistôt súvisiacich s mastnými kyselinami-, od úplného vylučovania až po malú časť.

Diméry/polyméry
Dve alebo viac molekúl tilpeptidu sa zhlukujú za vzniku diméru alebo vyššieho. Molekulová hmotnosť diméru je dvakrát vyššia ako u hlavného píku a pri HPLC je to často široký pík, takže sa musí špeciálne separovať a vyčistiť predtým, ako sa môže použiť ako kontrola. Pripravili sme diméry a na dosiahnutie čistoty viac ako 95 % bolo potrebných niekoľko kôl čistenia.

Nečistoty súvisiace-s linkerom
Modifikácia mastnej kyseliny tilpeptidu využíva linker (napr. -Glu, PEG, atď.) a tento linker samotný môže počas syntézy vytvárať vedľajšie reakcie, generujúce nečistoty s chýbajúcimi alebo neúplnými linkermi. Tento druh nečistoty sa nenachádza v bežných peptidoch, ale je jedinečný pre tilpeptid, ktorý je potrebné špecificky študovať.

Deamidované nečistoty
Asparagín (Asn) a glutamín (Gln) sa ľahko deamidujú v kyslých alebo zahrievacích podmienkach, čo vedie k izomérom. V sekvencii tilpeptidu je niekoľko Asn a Gln a deamidačná nečistota sa často objavuje v teste nútenej degradácie, takže na lokalizáciu nečistoty sa musí použiť kontrolný produkt.

Diastereoizoméry
Počas syntézy s dlhým reťazcom môžu jednotlivé aminokyseliny prejsť racemizáciou, čo vedie k diastereoizomérom. Obsah tohto druhu nečistôt zvyčajne nie je vysoký, ale odborníci sa budú pýtať pri deklarovaní a je lepšie mať kontrolný produkt na potvrdenie.

Mnohé z týchto nečistôt sa nedajú kúpiť a je potrebné ich syntetizovať na mieru. Urobili sme veľa projektov na prispôsobenie nečistôt tilpeptidu, ktoré pokrývajú všetky vyššie uvedené kategórie.

Delécia peptidovej série
We synthesize whatever is missing. For example, the lysine at position 20 is missing, or the amino acid near the fatty acid attachment site is missing. We will synthesize according to your process impurity profile, and the purity is usually >95 %, s potvrdením MS a NMR. Syntetizovali sme sadu peptidov s 5 aminokyselinovými rozstupmi od N-konca po C-terminál.

Oxidujúce nečistoty
Met in Tilpeptide is oxidized to sulfoxide or sulfone, and we can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control product. We can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control. The purity is >95 % a môžeme poskytnúť LC-MS spektrum na potvrdenie stupňa oxidácie. Sulfoxid a sulfón sa oddelia pomocou HPLC a môžeme urobiť oboje.

Produkty na odbúravanie mastných kyselín
Toto je jedna z najťažších nečistôt, s ktorou sa v tilpeptide pracuje. Reťazec mastnej kyseliny môže byť úplne alebo čiastočne vypnutý (napr. chýba niekoľko posledných uhlíkov). Môžeme syntetizovať sériu variantov pre rôzne polohy reťazca. V jednom z najkomplikovanejších projektov, ktoré sme robili, nás zákazník požiadal, aby sme syntetizovali nečistotu s 8 uhlíkmi chýbajúcimi v reťazci mastných kyselín a trvalo nám dva mesiace, kým sme to spravili.

Dimer
Diméry vytvorené krížovým{0}}prepojením alebo ne{1}}kovalentnými interakciami možno pripraviť rôznymi metódami a izolovať a purifikovať, aby poskytli kontroly vysokej čistoty. Čistenie dimérov je náročné, ale máme skúsenosti, aby sme vedeli, ako monoméry oddeliť.

Nečistoty súvisiace-s linkerom
Linker (-Glu, PEG atď.) môže chýbať alebo môže byť neúplný, čo vedie k sérii súvisiacich nečistôt. Môžeme syntetizovať rôzne varianty s chýbajúcimi linkermi, skrátenými linkermi alebo nesprávne spárovanými linkermi a pomôcť vám vytvoriť spektrá takýchto nečistôt.

Deamidované nečistoty
Pre miesta Asn a Gln v sekvencii môžeme pripraviť dezaminované kontroly nečistôt nútenou degradáciou alebo cielenou syntézou. Rozdiel v molekulovej hmotnosti po deamidácii je len 1, čo nie je ľahké rozlíšiť pomocou MS, preto na potvrdenie zvyčajne používame NMR alebo špeciálne chromatografické podmienky.

Iné prispôsobené nečistoty
Ak vo svojom výskume nájdete novú neznámu nečistotu, môžeme vám pomôcť analyzovať štruktúru a syntetizovať ju. Pošlite nám vzorky, urobíme LC-MS analýzu, odvodíme štruktúru, potom smerovú syntézu a potom porovnáme retenčný čas a hmotnostné spektrum, aby sme potvrdili zhodu. Tento proces sme robili mnohokrát a úspešnosť je pomerne vysoká.

Vývoj a validácia analytických metód
Pri nastavovaní metódy HPLC alebo LC{0}}MS je potrebná kontrola nečistôt na lokalizáciu, stanovenie separácie, overenie lineárneho rozsahu a výťažnosť. Bez kontroly chýba validácia metódy. Mnoho zákazníkov nás žiada, aby sme najprv urobili niekoľko kľúčových nečistôt na nastavenie metódy a potom pomaly doplnili zvyšok.

Heterogénna hmotnostná spektrometria
Keď sa deklaruje generický liek, vyžaduje sa komplexná kvalitatívna a kvantitatívna analýza procesných nečistôt a produktov degradácie. Lokalizáciu, obsah a štruktúru každej nečistoty je potrebné potvrdiť kontrolným produktom. Videli sme, že vyhlásenie o informáciách bolo zaslané na vyplnenie, deväťkrát z desiatich sú nečistoty tohto kusu nerozumeli.

Štúdie stability
Pri dlhodobej{0}}stabilite a zrýchlených testoch je potrebné určiť, ktoré produkty degradácie sú dominantné a aký je trend v obsahu. Pomocou kontroly nečistôt môžeme presne kvantifikovať a monitorovať. Zákazník robil stabilitu prípravy tilpeptidu a zistil, že vrchol degradácie rástol veľmi rýchlo za zrýchlených podmienok, takže sme ho analyzovali a syntetizovali pomocou MS, aby sme potvrdili štruktúru, a potom sa zákazníkovi uľavilo, že to nahlásil.

Testovanie dávkového uvoľnenia
Po komercializácii musí byť každá šarža API alebo formulácie testovaná na danú látku. Kontroly nečistôt sú základnými nástrojmi na testovanie uvoľňovania.

Informácie o deklaráciách generických liekov
Štúdie nečistôt sú kľúčovou časťou informácií o podaní. Poskytnutie úplných údajov o profilovaní nečistôt a kontrolných údajoch výrazne znižuje riziko prepustenia na preskúmanie.

Prípad 1: farmaceutická spoločnosť, program generických liekov tilpeptide
Vyvíjajú generickú verziu tilpeptidu a potrebujú kompletnú sadu kontrol nečistôt na validáciu metódy. Prispôsobili sme im 12 nečistôt: 5 chýbajúcich peptidov, 2 oxidované nečistoty, 1 dimér, 2 produkty vylučovania mastných kyselín a 2 nečistoty súvisiace s linkerom. Každý z nich má čistotu viac ako 95 % a je sprevádzaný údajmi MS a NMR. Vedúci projektu povedal: "Nečistôt tilpeptidu je dvakrát toľko ako iných peptidov, ale môžete ich vyrobiť všetky a údaje sú úplné, čo nám ušetrí veľa práce." Neskôr sa úspešne ukončila validácia ich metódy a teraz sa pripravujú na vyhlásenie.

Prípad 2: CRO spoločnosť, profilovanie nečistôt
Uskutočnili kvalitný výskumný projekt tilpeptidu, ktorý si vyžadoval komplexnú analýzu procesných nečistôt. Poslali nám vzorky surového peptidu a my sme vykonali LC-MS analýzu, odvodili možné štruktúry niekoľkých neznámych nečistôt, potom sme ich cielene syntetizovali a porovnali retenčné časy a hmotnostné spektrá a potvrdili štyri nové nečistoty - dve z nich súviseli s linkerom- a dve z nich boli varianty uvoľňovania mastných kyselín. Klient použil tieto údaje na spresnenie profilov nečistôt a úspešne prešiel akceptáciou klienta.

Prípad 3: Štúdie stability, biotechnologická spoločnosť
Skúmali stabilitu tilpeptidovej formulácie a zistili, že množstvo degradačného produktu sa rýchlo zvyšuje za zrýchlených podmienok, ale nevedeli, čo to je. Vzorku sme analyzovali pomocou LC-MS a predpokladali sme, že ide o deamidačnú nečistotu na určitom mieste Asn, a potom sme ju cielene syntetizovali a potvrdili porovnaním. Zaviedli test s použitím tejto kontroly a presne monitorovali trend degradačného produktu. Neskôr, keď predložili správu, odborníci túto časť údajov zdôraznili a kvôli solídnym údajom nebola vydaná žiadna kompenzácia.

Tilpeptid je populárny produkt, ale štúdium nečistôt je chúlostivá práca, najmä produkty na exfoliáciu mastných kyselín a nečistoty súvisiace-s linkermi, s ktorými si mnohí výrobcovia nevedia poradiť. Ak robíte kvalitný výskum alebo všeobecný vývoj tilpeptidu a potrebujete kontrolu nečistôt, neváhajte nás kontaktovať. Urobili sme veľa práce, vieme, aké sú ťažkosti a vieme, ako sa z toho dostať.